Indagine citofluorimetrica e citologica sugli emociti del mollusco gasteropode Pomacea canaliculata dalla schiusa all'età matura

Pomacea canaliculata è un gasteropode di acqua dolce originario del Sud America, successivamente introdotto in Asia e ad oggi annoverato tra le specie più invasive al mondo. Il sistema immunitario di P. canaliculata si basa su una componente umorale ed una cellulare; quest’ultima comprende emociti ripartiti su base microscopica in Gruppo I (GI) (minori dimensioni e blast-like) e Gruppo II (GII) (maggiori dimensioni, minor indice nucleo/citoplasma, agranulari oppure granulari). Le cellule con morfologia intermedia sono conteggiate in GI. Date le limitate conoscenze nei molluschi relativamente alle dinamiche numeriche e morfologiche delle popolazioni emocitarie durante l'accrescimento, questa tesi si pone l’obiettivo di indagare la composizione e distribuzione delle popolazioni emocitarie di P. canaliculata dal primo mese post-schiusa fino all’età adulta inoltrata, specificamente nei time point 1, 2, 3, 4, 5, 7, 9, 15 mesi post-schiusa (mph). Tramite prelievo di emolinfa e utilizzo di una sonda vitale fluorescente, per ciascun time point è stato possibile quantificare gli emociti appartenenti ai gruppi GI e GII mediante analisi citofluorimetrica. In seguito, è stato calcolato il rapporto GI/emociti totali e sono state condotte analisi statistiche sia per il confronto tra gruppi che, mediante PaleoTS, per descrivere l’andamento temporale durante l’accrescimento. Le analisi citofluorimetriche sono state affiancate da analisi morfologiche su vetrini ottenuti mediante citocentrifugazione di emolinfa. Negli individui di 1 mph, vista l’impossibilità di condurre analisi citofluorimetriche per il ridotto volume di emolinfa prelevabile, è stata condotta un’indagine cito-istologica. Le indagini condotte hanno dimostrato la presenza di emociti circolanti e tessuto-residenti già nel primo stadio di accrescimento analizzato (1 mph). Gli emociti a 1 mph si sono rilevati morfologicamente indistinguibili rispetto a quelli di individui adulti. Seppur con una forte variabilità individuale, l'analisi citofluorimetrica ha rilevato differenze significative nelle proporzioni delle popolazioni emocitarie durante l’accrescimento, con un picco transitorio delle cellule GI a 3 e 4 mph, seguito da un calo e poi da una stabilizzazione a partire da 7 mph, suggerendo che, in determinati momenti dell’accrescimento, le esigenze fisiologiche dell’animale richiedano proporzioni diverse dei due morfotipi emocitari. L’analisi statistica ha confermato che l'andamento temporale complessivo delle popolazioni emocitarie presenta oscillazioni in specifici time point, senza che si individui un trend temporale direzionale. Benché ulteriori indagini siano necessarie per chiarire il significato biologico di tali dinamiche, questa tesi si pone tra le prime ricerche per lo studio delle dinamiche emocitarie durante l’accrescimento e offre spunti per circoscrivere momenti chiave dello sviluppo post-schiusa funzionali all’utilizzo di P. canaliculata come modello sperimentale nell’immunologia comparata e dello sviluppo negli invertebrati.