Il recettore della sfingosina 1-fosfato (S1PR1) inibisce l'attivazione di cAMP/PKA-pathway mediata da FSH

L’ormone follicolo stimolante (FSH) è una gonadotropina che regola le funzioni riproduttive attraverso il legame con il suo recettore espresso sulla superficie delle cellule della granulosa ovariche. Tali cellule esprimono altri recettori appartenenti alla famiglia dei recettori accoppiati a proteina G, tra cui il recettore dalla sfingosina-1-fosfato (S1PR1), la cui funzione a livello ovarico non è ancora del tutto chiarita. Studi precedenti hanno dimostrato che questa molecola attiva vie di trasduzione del segnale sovrapponibili a quelle indotte da FSH, suggerendo un’azione sinergica dei loro recettori nella modulazione dello sviluppo del follicolo ovarico. Lo scopo di questo studio è stato quello di valutare l’interazione molecolare tra S1PR1 e FSHR, e come questa possa svolgere una modulazione allosterica della via adenosina monofosfato ciclico/proteina chinasi A (cAMP/PKA) mediata da FSHR e attivata da FSH. Le analisi sono state svolte utilizzando come modello sperimentale la linea cellulare Human Embryonic Kidney 293 (HEK293) trasfettata con plasmidi codificanti per S1PR1 e FSHR, fusi con specifici fluorofori. L'interazione tra i recettori è stata analizzata mediante immunofluorescenza, mentre l’azione modulatoria esercitata da S1PR1 sulla via di trasduzione del segnale cAMP/PKA mediata da FSHR è stata valutata misurando la produzione di cAMP intracellulare, mediante bioluminescence resonance energy transfer (BRET), e la fosforilazione del fattore di trascrizione cAMP response element-binding protein (CREB), mediante Western blotting, in seguito al trattamento con FSH 10 nM. I risultati ottenuti mediante immunofluorescenza dimostrano la co-localizzazione di FSHR e S1PR1 a livello della membrana plasmatica, suggerendo un’interazione molecolare tra i due recettori. Inoltre, in cellule HEK293 trasfettate con una concentrazione fissa di FSHR e quantità crescenti di S1PR1, il trattamento con FSH induce una produzione di cAMP intracellulare significativamente ridotta all’aumentare dell’espressione di S1PR1. L’effetto inibitorio di S1PR1 sulla via cAMP/PKA FSH-dipendente si ripercuote anche sulla fosforilazione di CREB: in cellule HEK293 esprimenti FSHR, la fosforilazione di CREB indotta da FSH si riduce all’aumentare dell’espressione di S1PR1. In conclusione, questi dati suggeriscono che FSHR e S1PR1 formano interazioni recettoriali sulla superficie cellulare e dimostrano che S1PR1 agisce come modulatore allosterico negativo di FSHR. I risultati ottenuti suggeriscono l’esistenza di partner di membrana di FSHR, con potenziali implicazioni sulla regolazione della fisiologia ovarica.