Analisi morfologica, citofluorimetrica e di espressione genica di emociti di Pomacea canaliculata in seguito a separazione con gradiente di Percoll.

Pomacea canaliculata è un gasteropode di acqua dolce invasivo la cui risposta immunitaria si basa esclusivamente sull'immunità innata. La componente cellulare di tale sistema, rappresentata dagli emociti circolanti, è stata finora caratterizzata unicamente su base morfologica, distinguendo emociti di Gruppo I (piccoli, rotondeggianti, con elevato rapporto nucleo/citoplasma) ed emociti di Gruppo II (di maggiori dimensioni, con o senza granuli citoplasmatici basofili). Tuttavia, una separazione funzionale delle diverse sottopopolazioni emocitarie rimane ancora da definire. Il presente studio ha impiegato la centrifugazione su gradiente discontinuo di Percoll (10%, 30%, 50% in Freshwater Snail Solution) al fine di separare e arricchire le principali popolazioni emocitarie in base a dimensione, densità e granulometria. Le frazioni ottenute sono state sottoposte a caratterizzazione morfologica mediante colorazioni citoistologiche (Ematossilina-Eosina e Diff-Quik), a citofluorimetria a flusso con e senza colorante vitale (CellTracker), e ad analisi molecolare tramite estrazione di RNA totale, retrotrascrizione e RT-PCR, utilizzando come marcatori due trascritti noti per la loro espressione negli emociti circolanti: Allograft Inflammatory Factor 1 (Pc-AIF1) e Transglutaminase 2 (Pc-TGase2). L'analisi morfologica e citofluorimetrica ha evidenziato un significativo arricchimento cellulare rispetto al campione di controllo di emolinfa totale. In particolare, la frazione al 50% di Percoll ha mostrato un arricchimento selettivo di emociti di Gruppo II granulari, mentre la frazione al 30% è risultata arricchita in cellule prive di granuli citoplasmatici. A livello molecolare, la frazione granulare (50% Percoll) ha mostrato espressione selettiva di Pc-TGase2, mentre la frazione al 30% ha evidenziato una maggiore espressione relativa di Pc-AIF1 rispetto alle altre frazioni. Nel complesso, i risultati ottenuti dimostrano la validità del gradiente discontinuo di Percoll come metodica per la separazione di sottopopolazioni emocitarie in P. canaliculata, ponendo le basi per future analisi molecolari e funzionali volte a definire in modo più approfondito il ruolo di ciascuna popolazione cellulare.