SVILUPPO DI UN MODELLO ANIMALE IN GRADO DI PRESENTARE LE VARIANTI VOLGARE, FOLIACEO E MUCOCUTANEO DEL PEMFIGO

Il pemfigo è un gruppo di patologie bollose autoimmuni croniche e potenzialmente letali della cute e delle membrane mucose, caratterizzato istologicamente da acantolisi. Tale processo è indotto da autoanticorpi circolanti diretti contro le caderine desmosomiali, principalmente la Desmogleina 1 (DSG1) nel pemfigo foliaceo (PF), la Desmogleina 3 (DSG3) nel pemfigo volgare (PV) a dominanza mucosa, e la combinazione di entrambe nella variante mucocutanea. Nonostante l'esistenza di modelli murini storici, l'incompleta replicazione della complessità fenotipica umana e la scarsa responsività ai trattamenti convenzionali limitano lo screening di terapie innovative. Lo scopo del presente studio è allargare lo spettro sperimentale in vivo attraverso lo sviluppo, la caratterizzazione e la validazione farmacologica di nuovi modelli murini attivi di pemfigo in grado di riprodurre fedelmente le principali varianti cliniche. I domini extracellulari di mDSG1 e mDSG3 sono stati espressi in cellule d'insetto Sf9 tramite sistema baculovirale e purificati mediante cromatografia d'affinità. La tolleranza immunologica periferica è stata interrotta immunizzando topi wild-type con rDSG1 e topi Dsg3-/- con rDSG3. Gli splenociti autoreattivi isolati dai donatori sono stati trasferiti adottivamente in topi immunodeficienti Rag2-/- mediante iniezione in vena caudale. La differenziazione dei modelli è stata ottenuta modulando l'inoculo: 20x10^6 cellule monovalenti per i modelli singoli (PF e PV) e una combinazione paritaria (10x10^6 + 10x10^6) per il modello mucocutaneo misto. I modelli sono stati monitorati per 63 giorni tramite PV score e saggi ELISA, e validati istologicamente. Per la validazione farmacologica, gli animali sono stati trattati con metil-prednisolone (100 mg/kg/die) dal giorno 7 al giorno 35. I topi riceventi hanno sviluppato spontaneamente i rispettivi fenotipi patologici. Il modello a singolo antigene DSG1 ha mostrato un decorso lieve, caratterizzato da eritema diffuso, alopecia e rare erosioni, mimando il PF. Al contrario, il modello combinato DSG1/DSG3 ha generato un quadro clinico acuto e significativamente più aggressivo, raggiungendo i valori massimi di PV score e di Area Sotto la Curva. Il saggio ELISA ha documentato un incremento progressivo e costante dei titoli di autoanticorpi circolanti nel tempo, correlato alla severità clinica. L'analisi istopatologica ha confermato la presenza di fessure e bolle acantolitiche caratteristiche a livello cutaneo e della mucosa orale. Il trattamento con m-PSL ha indotto una drastica riduzione del PV score nel modello misto e un decremento significativo dei titoli anticorpali in tutti i gruppi trattati, confermando la responsività del modello alla terapia steroidea. Lo studio ha dimostrato con successo l'efficacia della strategia di trasferimento adottivo combinato per la generazione di robusti modelli attivi di pemfigo. La sensibilità dimostrata nei confronti del metil-prednisolone valida questi sistemi biologici come piattaforme precliniche standardizzate e affidabili, ideali per il futuro screening di strategie terapeutiche sperimentali mirate al trattamento di tutte le varianti di Pemfigo.